篇一：生物化学实验考试试题(完整版)

　　生物化学实验

　　二、填空题：

　　1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和 （考马斯亮

　　蓝G-250染色法）。

　　2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT

　　与H2O2反应结束，再用 （碘量法） 测定未分解的H2O2。

　　3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以 （聚丙烯酰胺凝胶） 作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr） 和交联剂（Bis） 在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED） ；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素） 。

　　4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析 ），（离子交换层析），（凝胶层析 ）和 （亲和层析） 。

　　5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。

　　6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈（大） ，Km愈大，表示E对S

　　的亲合力愈（小） 。

　　7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。

　　8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。

　　9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。

　　10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由 和交联剂 在催化剂作用下聚合而成的，在具有自

　　由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。

　　11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄

　　膜层析）。

　　参考答案：

　　生物化学实验

　　一、名词解释：

　　1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。

　　2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。

　　3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。

　　4、酶活性：酶催化化学反应的能力，往往以酶促反应的初速度表示。

　　5、分光光度法：基于溶液对光吸收的大小来确定被测组份的含量的分析方法称为分光光度法或吸光光度法。

　　6、层析技术：是利用被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、

　　分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度在流动相和固定相中进行分配，最终达到分离

　　目的。

　　7、比活力：即每毫克酶蛋白所含酶的活力单位数。比活力高，表示酶纯度高。

　　二、填空题：

　　9. 丙烯酰胺单体（Acr），N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）

　　1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。

　　答：(1)考马斯亮蓝G-250染色法：

　　考马斯亮蓝G-250结合蛋白质后，形成蓝色CBG-蛋白质结合物，最大光吸收在595nm。在一定的蛋白质浓度范围内（10-1000ug/ml），CBG-蛋白质结合物的O.D595nm值与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法进行蛋白质的定量测定。

　　（2）双缩脲法：

　　蛋白质含有两个以上的肽键（-CO-NH-）因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，而与蛋白质的相对分子质量及aa成分无关，故可以用来测定蛋白质含量；

　　（3）Folin-酚试剂法（Lowry法）：

　　是双缩脲法的发展，第一步涉及到碱性溶液中铜蛋白质复合物的形成，然后这个复合物还原磷钼酸－磷钨酸试剂，产生深蓝色（钼蓝和钨蓝混合物）比双缩脲法灵敏，但费时；

　　（4）紫外吸收法：

　　蛋白质中一些氨基酸残基中的苯环含有共轭双键，所以蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm处，在一定范围内，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质含量成正比，可用作定量测定，简单、灵敏、快速、不耗样品，低浓度的盐类不干扰。

　　（5）微量凯式定氮法：

　　根据蛋白质的平均含氮量为16%，因此，测得1g蛋白氮，相当于6.25g蛋白质。

　　2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。

　　答：三个不连续：（1）凝胶由上下两层凝胶组成，两层凝胶的孔径不同；

　　（2）缓冲液离子组成及各层凝胶的pH不同；

　　（3）在电场中形成不连续的电位梯度。

　　三种物理效应：（1）电荷效应：酶蛋白按其所带电荷的种类及数量，在电场作用下向一定的电极以一定的速

　　度泳动。

　　（2）分子筛效应：分子量、形状不同的分子在经过凝胶孔径过程中，受到的阻力不同，因此

　　移动速率不等。

　　（3）浓缩效应：使待分离样品中的各组分在浓缩胶中被压缩成层，使原来很稀的样品得到高

　　度的浓缩。

　　3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？

　　答：（1）带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快；

　　（2）颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快；

　　（3）电场强度：电场强度越小，电泳速度越慢，反之越快；

　　（4）溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速度越慢，反之越快；

　　（5）溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快；

　　（6）离子强度：离子强度越大，电泳速度越慢，反之越快；

　　（7）电渗现象：电场中，液体相对于固体支持物的相对移动；

　　（8）支持物筛孔大小，孔径越小，电泳速度越慢，反之越快。

篇二：生化实验试题

　　改良Lowry氏法测定蛋白质含量，醋纤膜电泳及凝胶层析分离蛋白质和SDS-PAGE三个实验属于蛋白质的内容，琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制和检测谷丙转氨酶活性属于酶的部分，观察激素对家兔血糖浓度的影响涉及信号转导和糖代谢章节的知识，质粒抽提、核酸电泳及PCR属于分子生物学的范畴。

　　一、选择题

　　1．本学期所做的聚丙烯酰胺凝胶电泳实验主要用来分离（ ）

　　A．核酸B．甘油三酯 C．糖 D．蛋白质

　　2．有关琥珀酸脱氢酶竞争性抑制实验的论述，错误的是（ ）

　　A．抑制剂结构与底物相似 B．抑制剂与酶的活性中心相结合

　　C．抑制剂与酶的结合是可逆的 D．抑制程度只与抑制剂的浓度有关

　　3．某学生用100ul可调微量移液器吸取68ul溶液，应该将此微量移液器刻度调为（

　　A. 068.0 B. 032.0 C. 680.0 D. 006.8

　　4．用Sephadex G-50分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶的层析方法称( )

　　A．离子交换层析 B．凝胶层析

　　C．亲和层析D．高效液相层析

　　5．在琼脂糖凝胶电泳中，使核酸在紫外透射仪下显色的是（ ）

　　A．氨基黑B．溴酚蓝 C．溴化乙锭 D．考马斯亮蓝

　　6．醋酸纤维素薄膜分离血清蛋白质时，各血清蛋白的泳动速率从小到大依次是（

　　A．α 1，α 2，β，albumin，γ globin B．albumin，α 1，α 2，β，γ globin

　　C．γ globin ，β，α 2，α 1，albumin D．γ globin，β，α 1，α 2，albumin

　　7．有关标准曲线法的描述，错误的是 （ ）

　　A．需要配制较多的标准管

　　B．待测管吸光度范围0.05-1.0 为宜

　　））

　　C．标准管与待测管的测定应在相同条件

　　D．所作标准曲线可供长期使用

　　8．一个基本的PCR反应体系应该包括（）

　　A．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Mg2+，primase，dNTPS，水

　　B．模板，Taq酶，PCR Buffer，Ca2+，primers，dNTPS，去离子水

　　C．模板，DNA-pol II，PCR Buffer，Ca2+，primase，dNTPS，去离子水

　　D．模板，Taq酶，PCR Buffer，Mg2+，primers，dNTPS，去离子水

　　9．对蛋白质定量的方法不包括（ ）

　　A．凯氏定氮法B．改良Lowry氏法

　　C．抽提法 D．紫外吸收

　　10．用分光光度法进行定量分析时，基本计算公式是（ ）

　　A．待测液浓度=（标准液吸光度/待测液吸光度）×标准液浓度

　　B．待测液浓度=（待测液吸光度/标准液吸光度）×标准液浓度

　　二、填空题

　　1．制备聚丙烯酰胺凝胶时催化剂是。

　　2．PCR可在体外对目的基因进行高效、快速、特异的扩增，它的每个循环包括三个步骤，分别是变性___、___退火____、__延伸___。

　　3．琥珀酸脱氢酶竞争性抑制过程中，加入液体石蜡的作用是实验中使用的抑制剂是丙二酸 。

　　4．ALT或GPT缩写代表，催化的反应是 。血清中ALT（GPT）活性单位的定义是：每毫升血清在pH7.4，37℃保温条件下与底物作用30min后，每生成_2.5_μg的丙酮酸为1个谷-丙转氨酶活性单位。

　　5． 分光光度计使用完毕时，为了延长仪器的使用寿命，滑杆应该放在光源对准_1档和2档交界处______休息态__的位置。

　　6．PCR总反应体系的体积是50μl，其中10×buffer加量应为_5__μl。

　　7．酵母核酸定量中，总磷管需要进行反应，将有机磷转变为需要用的重要试剂是 ，试剂酒精灯加热反应过程经历颜色变化为 。

　　8．用离心机离心前，必须将装有样品的离心管_配平_______，并_____对称______放置于离

　　心机的离心平台上，然后盖好上盖，才能开启电源。

　　9．激素对家兔血糖浓度的影响实验中，升高血糖的激素是 肾上腺素，降低血糖的激素是 胰岛素 。

　　三、判断题

　　1. 蛋白质在小于等电点的pH溶液中，带负电，电泳时向正极移动。（ F ）

　　2. Lambert-Beer定律公式为A=KcL，其中K为消光系数，表示物质对光线吸收的能力。（T）

　　3. 酵母核酸提取实验中，甲苯的作用是使蛋白质变性。（）

　　4. 聚合酶链式反应（PCR）必需明确待扩增基因片段的全部序列。（ ）

　　5. 琼脂糖电泳分离核酸时（pH7.4），核酸样品应点在负极端。（ T）

　　6. 血糖测定实验中，兔血经加抗凝剂离心后所得到的上清液是血清。（ F ）

　　四、简答题

　　1．简要叙述分光光度计使用方法。

　　开机，调至要使用的波长，预热20min

　　将待比溶液倒至比色杯中，高度为2/3-4/5，手拿毛面，朝向自己，放入样品室

　　调至T档，拉杆拉至0档（空白管），调节T=100%

　　拉杆拉至1档，调节T=0

　　调至A档，拉杆拉至2,3。。。档，读取标准液、待测液的吸光度

　　取出后关机

　　2. 简述改良Mohum法测定谷丙转氨酶GPT活性实验中对照管的作用？

　　五、实验计算题

　　1. 采用邻甲苯胺法测定血糖浓度。

　　葡萄糖标准液（0.4 mg/ml）取0.5ml，待测血浆取0.1ml。

　　邻甲苯胺显色（反应总体积均为7ml）后，620nm波长比色，以空白管调零后读得：A标 = 0.400；A测 = 0.220

　　请按照上述条件采用标准管法计算待测血浆中血糖的浓度（以mg/100ml为单位）。 C=(0.220/0.1)/(0.400/0.5)*0.4*100=110