生物大分子的分离纯化一般可以分为以下几个阶段:○1材料的选择和预处理;○2破碎细胞及提取;○3分离和纯化:包括粗分级分离和细分级分离;其中前两个阶段为生物大分子分离纯化的前处理。
离心的原理:将样品放入离心机转头的离心管内,离心机驱动时,样品液就随离心管做匀速圆周运动,于是就产生了一个向外的离心力。由于不同颗粒的质量,密度,大小及形状等彼此各不相同,在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不同,由此便可以得到相互间的分离。受到的力:离心力、介质的摩擦阻力、浮力、重力及重力浮力(均可忽略不计)
本次试验包括“各谷物中营养成分的测定”和“苯丙氨酸解氢酶的纯化及活性测定”两个试验。
苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanine:ammonie lyase,简称PAL;EC4.3.1.5)是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等的合成密切相关。在植物生长发育和抵制病菌侵害的过程中起重要作用。PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在290nm处有强大的吸收值。规定1h内增加0.01为PAL的一个活力单位。酶的比活力是指样品中每毫克蛋白所含的酶活力单位数。在实验中将会看到随着PAL的逐步被纯化,其比活力也在逐步增加。
在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐(如硫酸铵、硫酸钠等)使蛋白质沉淀析出称为盐析。溶液的盐浓度通常以盐溶液的饱和度表示,饱和溶液称100%饱和度。沉淀一种酶所需的具体浓度需要经试验确定。
谷类含蛋白质在8-12%之间,因谷粒外层蛋白质较里层含量高,因此,精制的大米和面粉因过多的去除外皮,使蛋白质含量较粗制的米和面低。谷类脂肪含量较少,约2%,但玉米和小米可达到4%,主要存在于糊粉层及谷胚中。大部分为不饱和脂肪酸,还有少量磷脂。胚芽油中含有较多的维生素E,有抗氧化作用。