3 结果

　　3. 1 丹蒌片对再灌注2 h 心肌酶的影响与假手术比较，模型组及丹蒌片组LDH 及CK-MB 均显著升高( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片组LDH 及CK-MB 均明显降低( P < 0. 05) 。

　　3. 2 丹蒌片对再灌注2 h 内皮功能的影响与假手术比较，模型组血清ET-1 显著上升( P < 0. 01) ，NO 明显下降( P < 0. 05) ; 与模型比较，丹蒌片组ET-1 明显下降( P < 0. 05) ，而NO 明显上升( P<0. 05) 。

　　3. 3 丹蒌片对再灌注2 h 心肌组织氧化损伤的影响与假手术组比较，模型组MDA 及MPO 均显著升高( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片组MDA 及MPO 明显降低( P < 0. 05) 。

　　3. 4 丹蒌片对再灌注48 h 心脏射血分数及心肌梗死面积的影响与假手术组比较，模型组及丹蒌片组大鼠EF 值显著下降( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片组大鼠EF 值明显上升( P < 0. 05) 。假手术组无心肌梗死; 与模型组比较，丹蒌片组心梗/缺血面积比率显著下降( P < 0. 01) 。

　　3. 5 丹蒌片对再灌注48 h 心肌细胞凋亡指数影响与假手术比较，各组心肌凋亡指数均有显著升高( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片能显著降低心肌凋亡指数( P < 0. 01) 。

　　3. 6 丹蒌片对再灌注48 h 心肌Caspase-3，Bax 及Bcl-2 的蛋白表达的影响与假手术比较，模型组及丹蒌片组Caspase-3 表达明显升高( P < 0. 05，P<0. 01) ; 与模型比较，丹蒌片组Caspase-3 表达显著降低( P < 0. 01) 。与假手术比较，模型组及丹蒌片组Bax 表达明显升高( P < 0. 05，P < 0. 01) ; 与模型比较，丹蒌片组Bax 表达显著降低( P < 0. 01) 。与假手术比较，模型组及丹蒌片组Bcl-2 表达显著降低4 讨论MIRI 在临床可表现为再灌注心律失常，心肌无复流现象及心肌顿抑等，此类患者预后不良，心力衰竭、心源性猝死等发生机率较高。其发生机制复杂，至今还未完全明确，综合以前研究结果认为，氧自由基损伤、炎症反应、内皮功能障碍、钙超载等在MIRI 过程中相互影响，对心肌造成巨大损害。其中内皮功能障碍是动脉粥样硬化发生发展的始动环节，更是贯穿心肌缺血及再灌注损伤的全过程。内皮损伤后其分泌功能障碍，扩血管物质NO 减少，破坏了与缩血管物质ET 间的动态平衡，一方面内皮损伤促进血管收缩心肌缺血进一步加重; 另一方面造成内皮细胞的屏障作用破坏，为中性粒细胞和单核细胞及炎性细胞物质的浸润提供了场所，间接加重炎症反应。此外MIRI 发生时，缺血区心肌神经末梢释放大量儿茶酚胺，被单胺氧化酶分解后产生大量氧自由基( OFR) ，超过机体的清除能力，引发链式脂质过氧化反应，损伤细胞膜、细胞器乃至细胞内核酸，进而导致细胞凋亡甚至坏死，OFR对组织的损伤要远远大于缺血本身造成的损伤。心肌细胞凋亡是MIRI 的最终环节，心肌缺血20 ～30 min 即可发生坏死并且具有不可再生的特性，故坏死周围的濒死心肌是临床治疗上争取的对象，阻止坏死周边心肌细胞凋亡成为治疗MIRI 的关键病理基础，文中提到的氧自由基、炎症因子、钙超载等共同对心肌细胞造成损伤导致细胞凋亡。Bax 和Bcl-2 是一对调节细胞凋亡的基因，Bax 促进细胞凋亡而Bcl-2 可抑制细胞凋亡，激活下一级Caspases酶系引起细胞的凋亡。其中Caspase-3 是细胞凋亡的主要执行者，活化后可分解细胞内的重要蛋白及底物，进而导致细胞凋亡。

　　本研究发现，丹蒌片在再灌注损伤发生的早期能促进MIRI 后内皮细胞NO 的释放，抑制缩血管物质的释放，修复受损的内皮分泌功能。MDA 反应体内自由基的多少，MPO 反应体内中性粒细胞的活动程度，丹蒌片能抑制心肌组织中MDA 及MPO 生成，改善自由基及炎症细胞对心肌的损伤。此外，丹蒌片在减少心肌梗死面积的同时还能有效阻止MIRI后心脏射血分数的下降趋势。有临床研究证实，低EF 值冠心病患者在冠脉旁路移植术前，应用主动脉内球囊反搏术可改善心功能后，能减少术后心梗、低心排血量等严重并发症的发生并能降低围术期病死率。另对择期PCI 的患者进行研究发现，白细胞计数，C 反应蛋白( CRP) 升高与EF 值降低有关，提示丹蒌片改善心脏EF 值可能与降低炎症反应的作用有关。本研究结果显示，丹蒌片可抑制心肌促凋亡蛋白Bax，Caspases-3 的表达，提高抑制凋亡基因蛋白Bcl-2 的表达，丹蒌片可能通过抑制细胞凋亡保护梗死区周围的心肌，从而降低心肌梗死区与缺血区比例，保护再灌注损伤的心脏。现代药理研究表明，丹蒌片成分中黄芪、丹参、葛根、川芎等诸多药物提取物均有广泛的心血管效应，采用生物信息学方法推测它们可能通过环加氧酶2，瘦素蛋白，一氧化氮合酶3 及低密度脂蛋白受体起作用，但尚缺乏相关实验验证，这些已知化学成分协同作用于心血管系统，从多途径、多靶点发挥MIRI 后对心脏的保护作用。

　　丹蒌片具有活血化痰、宽胸通阳之效，在临床应用中对稳定型心绞痛、支架植入术后患者及非血运重建急性冠脉综合征患者均有确切的疗效，亦有临床研究表明丹蒌片具有一定的降血脂和稳定斑块作用，加之其降血压和减慢心率的作用共同组成缓解临床症状的基础。MIRI 是一个复杂的病理过程，心肌细胞坏死及凋亡是心肌组织学损害的最终结果，该过程有大量信号通路参与，损害通路和救助通路交织成网状。本实验探索了丹蒌片治疗MIRI 机制，至于其对信号通路及其相关调控蛋白基因的影响有待于进一步研究，明确其作用机制，为丹蒌片防治MIRI 提供基础数据和实验支撑。