天胡荽药材中槲皮素的实验鉴定论文

时间：2021-08-31

天胡荽药材中槲皮素的实验鉴定论文

　　1 仪器与试药

　　Agilent1100型高效液相色谱仪（自动进样品），二极管阵列检测器（DAD）； AB104-N型电子天平（德国Mettler-Toledo Group公司）；薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水；槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100081-200406）；10批天胡荽药材样品采自贵州各地，经笔者鉴定为伞形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破铜钱Hydrocotyle sibthorpioides Lam.Var.batrachium（Hance）Hand.-Mazz.ex Shan的干燥全草。

　　2 方法与结果

　　2.1 定性鉴别

　　2.1.1 供试品溶液的制备

　　取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约3 g，精密称重，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液（4∶1）提取液75 ml，置水浴中加热回流1 h，滤过，将滤液水浴蒸干，用适量蒸馏水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯30 ml（10，10，10 ml）萃取，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇3ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。

　　2.1.2 对照品溶液的制备

　　精密称取槲皮素对照品13.6 mg，置50 ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

　　2.1.3 薄层色谱法［4］

　　照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及槲皮素对照品溶液各10 μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）为展开剂，置盐酸蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。

　　2.2 HPLC测定

　　2.2.1 色谱条件

　　色谱柱为Dikma公司Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μｍ）；流动相为乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。检测波长370 nm，柱温25℃。进样量10 μl。理论塔板数按槲皮素计算，应不低于5 000。在此色谱条件下，槲皮素对照品、天胡荽药材的HPLC图谱见图1～2。

　　2.2.2 对照品溶液的制备

　　精密吸取“2.1.2”项下的槲皮素对照品溶液1ml，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约0.5 g，精密称重，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液（4∶1）提取液25 ml，称定重量，置水浴中加热回流1 h，放冷，称重，用提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5 ml至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

　　2.2.3 线性关系考察

　　精密吸取槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，进样，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标，槲皮素进样量为横坐标，进行线性回归分析，线性回归方程： Y=6 442.9X-1.491 5，r=0.999 8，结果表明槲皮素在0.010 88～0.108 8 μg进样量与峰面积的`线性关系良好。对照品溶液10 μl，连续进样5次，记录色谱图，结果槲皮素峰面积的RSD为0.19%。取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10 h进样，记录色谱图，结果槲皮素峰面积的RSD为1.15%。表明供试品溶液在10 h内稳定。取同批药材5份，精密称定，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备并测定，槲皮素平均含量为0.11%，RSD为0.96%。

　　3 结果

　　天胡荽为伞形科植物天胡荽或破铜钱的干燥全草，具有清热解毒、利湿之功效，用于黄疸型肝炎、胆结石、目翳［1］治疗。天胡荽含槲皮素（quercetin）、槲皮素-3-半乳糖苷（quercetin-3-galactoside）等黄酮类化合物［2］，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变等多种功能［3］，是天胡荽药材的有效成分之一。通过实验发现，在槽内先加入展开剂，再在展开缸内用小烧杯盛上盐酸，然后进行薄层板预饱和30min，再展开，其色谱斑点圆而集中，分离度较好。天胡荽药材除了含有槲皮素外，还有多种黄酮苷，本文以盐酸和硫酸作为水解酸进行了比较，还对水解酸的浓度、溶剂和提取时间进行了考察。结果本文所用的条件较好。

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