双柏凝胶剂中大黄素测定实验论文

时间:2021-08-31

双柏凝胶剂中大黄素测定实验论文

  1 仪器与试药

  1.1 仪器高效液相色谱仪(日本岛津):LC-10ATvp双泵,SLC-10Avp控制器,SPD-10Avp紫外检测器,CTO-10ASvp柱温箱。

  1.2 试药大黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为0756-9908);甲醇为色谱纯;大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、薄荷由柳州市神农中药饮片厂提供,经柳州市中医院药检室鉴定,符合《中国药典》要求;其余试剂均为分析纯。

  2 方法与结果

  2.1 凝胶剂的制备取处方量的大黄(A)和根据双柏散处方比例称取药材粗粉(B),均加95%乙醇浸泡6 h,以5~7 ml/min的速度渗漉提取,相应渗漉液浓缩至约50 g,加入3 g 卡波姆940,密闭放置过夜使其充分溶胀,加蒸馏水至100 g,研匀即得。分装于密闭避光的容器中,贮存于凉处。A:大黄凝胶;B:双柏凝胶

  2.2 建立测定方法

  2.2.1 色谱条件

  色谱柱为选Kromasil- C18 柱(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-水(6:4);流速1.0 ml/min;检测波长254 nm;柱温30℃;进样量:10 μl。

  2.2.2 对照品溶液制备

  精密称取大黄素对照品5 mg,加甲醇溶解定容至25 ml,制成0.2 mg/ml的溶液,即可。

  2.2.3 供试品溶液制备

  精密称取凝胶剂1 g,水浴浓缩至近干,加蒸馏水10 ml,浓盐酸1 ml,沸水浴中水解30 min,再加氯仿20 ml,超声振荡20 min,置分液漏斗中分层,取氯仿层;水层用氯仿洗3次,每次10 ml,合并氯仿液,挥干。加适量甲醇溶解,转移至10 ml容量瓶中,超声振荡数分钟使溶解完全,加甲醇至刻度,摇匀。针孔式微孔滤膜过滤,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。

  2.2.4 线性关系

  考察精密吸取对照品溶液用流动相稀释成0.4,1.0,2.0,4.0,10.0 μg·ml-1进样10 μl测定,以大黄素进样量(Y)和峰面积(X)进行线性回归,求得标准曲线的回归方程为:Y=3 300.3X-1 422,r=0.999 8。结果表明大黄素进样量在0.4~10 μg·ml-1范围内有良好的线性关系。

  2.2.5 精密度实验

  精密吸取上述对照品溶液10 μl,重复进样测定5次,结果大黄素峰面积值的'RSD=0.59%,表明仪器精密度良好。取供试品溶液,于0,1,2,3 h分别进样测定峰面积,结果RSD=0.42%。表明供试品在3 h内稳定。实验全部选择雄性昆明小鼠可便于取皮操作及结果数据的平行。同时以高效液相色谱法为离体鼠建立了可靠的体外测定方法,在渗透实验中,由于皮肤与介质长时间接触,皮肤中蛋白质等物质易脱落,溶解,会导致混浊或呈乳光,本文酸化样液以游离出脂溶性大黄素,然后氯仿提取,从而消除了皮肤中蛋白等成分对色谱柱的影响。

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